ФОРМА N 253/У РАБОЧИЙ ЖУРНАЛ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. Журнал посещений микробиологической лаборатории

Хроники одной лаборатории | intalent.pro

Лаборатория… Для большинства людей это слово окутано ореолом таинственности и научной романтики, да что там говорить: когда слышишь слово “наука” — представляешь лабораторию, и наоборот. Согласитесь: вам хоть одним глазком хотелось бы заглянуть туда. Многие с завистью слушают рассказы о работе счастливчиков, которым удалось стать сотрудником какого-нибудь НИИ или хотя бы просто клинической лаборатории. На страничке у таких вы обязательно найдете фото где они, замотанные до ушей в ватно-марлевые маски, в мятых, безразмерных халатах зловеще вытягивают руки в перчатках, стоя возле загадочно белеющего холодильника…

Сегодня, друзья, у вас есть уникальный шанс оказаться, пусть и виртуально, в самой настоящей бактериологической лаборатории и своими глазами увидеть, какие же тайны кроются за этой белой дверью со знаком биологической опасности и надписью «Посторонним вход воспрещен!».

Сразу хочу отметить, что практически все лаборатории, в которых проводятся бактериологические исследования, похожи одна на другую. Не в прямом, конечно, смысле, но набор помещений, мебели и оборудования, в целом, одинаков и качественно зависит лишь от уровня финансирования. Итак, открыв заветную белую дверь вы окажетесь в коридоре, из которого можно попасть в различные помещения. По ним мы сейчас и пройдемся.

Раздевалка

Театр начинается с вешалки, а лаборатория – с раздевалки. Все сотрудники, приходя на работу (если они уважают свой статус микробиолога), переодеваются в рабочую одежду. Как правило – это обычная пижама с длинным рукавом и тапочки. Очень бедные сотрудники, увы, просто надевают халат поверх повседневной одежды.

Вообще, смысл пижамы в том, чтобы не контаминировать свою повседневную одежду, не испортить её, случайно пролив что-нибудь и не вонять в общественном транспорте дезинфектантами. Халат же — дополнительная мера защиты, надевается при непосредственной работе с микроорганизмами. И чем опаснее микроорганизм, с которым работает микробиолог, тем более жесткие требования предъявляются к его защитной одежде. Для работы с особо опасными инфекциями используют специальные противочумные костюмы и индивидуальные средства защиты органов дыхания (респираторы и противогазы), а при работе с особо вирулентными штаммами бактерий и вирусов – изолирующие пневмокостюмы с принудительной подачей чистого воздуха.

Вообще, смысл пижамы в том, чтобы не контаминировать свою повседневную одежду, не испортить её, случайно пролив что-нибудь и не вонять в общественном транспорте дезинфектантами. Халат же — дополнительная мера защиты, надевается при непосредственной работе с микроорганизмами. И чем опаснее микроорганизм, с которым работает микробиолог, тем более жесткие требования предъявляются к его защитной одежде. Для работы с особо опасными инфекциями используют специальные противочумные костюмы и индивидуальные средства защиты органов дыхания (респираторы и противогазы), а при работе с особо вирулентными штаммами бактерий и вирусов – изолирующие пневмокостюмы с принудительной подачей чистого воздуха.

Пришедший на смену классическому противочумному костюму, комбинезон “Кварц” есть почти в каждой лаборатории, работающей с ООИ, но используется редко, т. к. работать в нем не очень удобно, да и ситуаций, когда он может понадобиться именно в лаборатории — мало. К тому же он — тканевый, что заметно снижает его барьерные свойства по сравнению с другими аналогами (см. Тайкем).

Это, наверное, самый узнаваемый комбинезон, широко растиражированный в новостях, фильмах и комиксах. Если где-то случилась эпидемия, то вы увидите мелькающих в кадре людей в “Тайкемах”. Изначально комбинезон разрабатывался для химиков, и, собственно, они его тоже используют (помните доктора Хайзенберга?). Но его отличные барьерные свойства, прочность, дешевизна и удобность понравились и микробиологам. Единственный его минус — он полностью воздухо- и влагонепроницаем, и работать в нем, например, в условиях Африки или тропиков — сущий ад.

Это уже серьезная штука. Если вы видите человека в такой костюме — дело плохо. Работают в таких только в очагах инфекций I группы патогенности. Так что, если противник применит биологическое оружие — смело надевайте “Треллкем” и отправляйтесь на прогулку — никакой вирус Эбола вам не страшен в любых концентрациях. Пока не закончится воздух в баллоне.

В лабораториях, которые работают с высоковирулентными штаммами бактерий и особо опасными вирусами, обычно используют более дешевые и удобные для работы варианты изолирующих пневмокостюмов. Чтобы не тратить средства на заправку газовых баллонов и не таскать их на себе во время работы такой костюм просто подключают через гибкий шланг к системе подачи воздуха, которой оборудованы такие лаборатории. Поступающий воздух надувает такой комбинезон что выглядит, конечно, смешно, но является дополнительной мерой защиты: в случае прокола перчатки или повреждения самого костюма воздух будет выходить из разрыва, предотвращая попадание патогенов.

Комната для персонала

Она же комната для работы с документами, она же чайно-пирожковая. Здесь, как вы уже догадались, производится оформление документации, хранятся различные журналы учета и контроля, коих в лаборатории очень много, работают на персональном компьютере (тут уж в зависимости от уровня бедности: бывает, что компьютер есть только у заведующей лабораторией, а бывает, что и у каждого врача/научного сотрудника). Здесь же, как правило, сотрудники гоняют чаи и обедают что, конечно, запрещено санитарными правилами, но — голову даю на отсечение — в любой лаборатории есть секретный чайник и шкафчик с чашками и печеньем. Конечно же, в лабораториях, работающих с возбудителями ООИ есть никто не станет, подумаете вы.

Препараторская/моечная/стерилизационная.

Это помещение больше всего похоже на кухню. Да, самую обыкновенную кухню с самой обыкновенной газовой или электрической плитой, кухонной вытяжкой, мойкой, шкафчиками, тумбами, полками и посудой (только лабораторной). Здесь проходит подготовительный этап всех исследований: мойка и стерилизация посуды. Сейчас на рынке широко представлена самая разнообразная одноразовая пластиковая посуда, которую используют в лабораториях: чашки Петри, пипетки, планшеты, матрасы и пр.

Но даже если лаборатория и может себе позволить закупать “пластик”, без “стекла” все равно не обойтись: пробирки, колбы, стаканы, флаконы нужны постоянно, и после каждого использования они обеззараживаются (на этом этапе мы еще остановимся позже) и поступают в моечную/стерилизационную, где, в зависимости от условий планируемого эксперимента, моются либо обычным способом под водопроводной водой и ополаскиваются в дистиллированной воде, либо химически чисто с применением, например, хромпика и ополаскиваются в деионизированной воде (в таком случае вы увидите поблизости деионизатор и дистиллятор). Счастливчики, имеющие лабораторные посудомоечные машины могут делать это автоматизированно.

Затем посуда сушится, упаковывается в бумагу и стерилизуется в сухожаровом шкафу 1 час при температуре 180 градусов.

Стерильную посуду готовят, как правило, с запасом, размещая неиспользуемую в шкафах. Помимо посуды шкафы забиты (при отсутствии кладовой) халатами и пижамами, перчатками, ватой и марлей, моющими средствами и дезинфектантами.

Комната для приготовления и розлива питательных сред

В крупных лабораториях это отдельное помещение (в НИИ, занимающихся микробиологией это может быть даже отдельная лаборатория, где среды готовят из исходного сырья: мяса, овощей, различных гидролизатов, солей, углеводов и пр.), в лабораториях поменьше среды варят и разливают либо в препараторской, либо непосредственно в микробиологических боксах до начала работы с культурами. Но обычно питательные среды готовят из сухих промышленных порошков.

Их растворяют в дистиллированной воде и кипятят в колбе на плите или водяной бане до полного растворения.

После остывания до температуры около 60–50 градусов среды, соблюдая стерильность, над пламенем горелки, разливают в чашки Петри и пробирки (в уже упоминавшихся отдельных лабораториях, где производят питательные среды, есть специальные устройства, разливающие их автоматически).

Среды, как и стерильную посуду, готовят тоже с запасом. Их можно хранить в холодильнике при +4 градусах, а перед использованием «подсушивать» для удаления лишней влаги в термостате.

Кладовая (которой может не быть), туалет и кабинет заведующего лабораторией являются вспомогательными помещениями (надеюсь, мой шеф никогда этого не прочтет) и подробно задерживаться в них мы не будем.

Микробиологический бокс

Вот мы и добрались до святая святых! Здесь, микробиологи, позаимствовав у старухи-Смерти ее игрушки, осуществляют свои загадочные манипуляции. В силу того, что микробиолог с легкостью может заразиться материалом, с которым он работает (т. к. вся суть микробиологического исследования направлена на одно: сконцентрировать возбудителей и накопить достаточную их массу для проведения исследования), то диапазон этих манипуляций ограничен. Проводить их можно только в пределах бактериологического бокса. Бактериологический бокс — это помещение особого режима, специально оборудованное для обеспечения безопасной работы с микроорганизмами. В зависимости от опасности микроорганизмов (все они разделены на 4 группы патогенности), боксы отличаются покрытием стен, пола и мебели и наличием систем биологической безопасности. К этим системам относится приточно-вытяжная вентиляция с преобладанием вытяжки, что создает пониженное давление в боксе, предотвращая выход воздуха из бокса в коридор при открывании двери, HEPA-фильтры, задерживающие бактерии в случае аварии (причем этот параметр регулярно проверяется), а также баки-отстойники для сточной воды куда поступает вся вода из лабораторных раковин, смешивается с дезинфектантами и лишь затем сливается в канализацию. Вообще, когда видишь бактериологический бокс первый раз, складывается впечатление, что здесь никто не работает, и все показное, потому что совершенно отсутствуют какие-либо признаки обжитости и минимального быта. Но этот минимализм оправдан: бокс должен постоянно тщательно убираться, обрабатываться дезинфектантами и облучаться ультрафиолетом. Вот поэтому вы никогда не увидите здесь фикусы на подоконниках или веселые календари на стенах.

Бокс имеет предбоксник, где микробиолог и лаборант (по правилам работать с микроорганизмами можно только в паре) надевают защитную одежду перед началом работы и снимают ее после завершения. В боксе расположен бактериологический стол – собственно рабочее место микробиолога, второй ограничительный контур для микроорганизмов, попадать за пределы которого они должны только внутри лабораторной посуды.

Последняя редакция санитарных правил работы с микроорганизмами предписывает работать с микроорганизмами в специальных ламинарных шкафах – боксах микробиологической безопасности, или, сокращенно, БМБ (их в лабораториях называют по старинке «ламинары»). Это, по-сути, тот же бактериологический стол, только в рабочей зоне непрерывно циркулируют ламинарные потоки воздуха, создающие воздушную завесу, рассчитанную на то, что микробы в случае аварии (аварией официально называется ситуация, при которой микроорганизмы оказались вне лабораторной посуды без контроля микробиолога, грубо говоря – вы что-то пролили или уронили, или пробирка лопнула в руках, или вы просто коснулись петлей с микроорганизмами наружного края пробирки или чашки Петри) не покинут пределы рабочей зоны и улетят в вентиляцию, где задержатся в HEPA-фильтрах (которые регулярно проверяют на проницаемость для бактерий). Также БМБ защищает посевы от загрязнения микробами из воздуха и с кожи и одежды самого микробиолога, обеспечивая чистоту работы (так что многие даже разливают в них среды).

На бактериологическом столе или внутри БМБ размещено только самое необходимое и нет ничего лишнего. И список этот строго регламентирован: емкость с дезраствором и марлевой салфеткой (по правилам, которые, однако, редко кто соблюдает, эта салфетка вынимается из дезраствора, отжимается и расстилается на рабочем месте и все манипуляции проводят над ней), набор для окраски по Граму (ванночка, рамка для стекла, красители, спирт, вода для промывания), часы (как правило, песочные 1- или 2-минутные, чтобы засекать время окрашивания), карандаши по стеклу или маркеры, газовая горелка или спиртовка, спички или зажигалка, бактериологическая петля, шпатель, карандаш (записи в боксе делают карандашом, чтобы в случае аварии, когда все заливается дезинфектантом, они не утратились), емкость с чистыми предметными стеклами, фиксатор для предметных стекол (на микробиологии учат фиксировать мазки на стеклах над пламенем спиртовки, но это запрещено при работе с возбудителями ООИ, такие мазки фиксируют, погружая в спирт), микроскоп, емкость для сброса пипеток. Это «стационарный» набор, все остальное: пипетки, пробирки, чашки со средами и т.д. приносит лаборант, который «накрывает стол» до начала работы.

Итак, остановимся на собственно манипуляциях с микроорганизмами. Как я уже упоминал, их можно проводить только в пределах бактериологического стола или БМБ.

Основными инструментами бактериолога являются петля, шпатель и пипетирующее устройство.

Манипуляций не так много: это посев на плотные среды (простое растирание бактериологической петлей или шпателем материала, содержащего микроорганизмы по поверхности плотной питательной среды), посев на жидкие питательные среды (простое погружение петли с материалом в пробирку со средой или внесение жидкого материала пипеткой), приготовление мазков на стекле (аналогичное посеву растирание материала с микроорганизмами в капле физраствора на предметном стекле) и титрование (серийное разведение различных концентраций микроорганизмов, когда первоначальная концентрация, определяемая путем измерения оптической плотности в приборе Densi-La-Meter (зачастую – просто «на глазок») и кратно переносится в фиксированные объемы физраствора для того, чтобы внести в питательную среду строго определенное количество микробных клеток).

Вот, собственно, и все манипуляции. С их помощью можно осуществлять посев, пересев, серотипирование, фаготипирование, приготовление мазков, определение биохимической активности и чувствительности к антибиотикам.

Остановимся подробнее на этих моментах, так как они и составляют собственно бактериологическое исследование.

Поступающий на исследование материал, как правило, переводят в жидкое состояние и разбавляют если это, например, фекалии, где микроорганизмов много или концентрируют если это, например, моча, где их мало центрифугированием.

Но большинство проб можно «сеять» сразу. Просто берем петлю, погружаем в материал и растираем по поверхности питательной среды. Микроскопию на первом этапе проводят редко, т. к. микроскоп позволяет обнаружить микробов только при концентрации более 1000/мл. Однако, есть такая замечательная штука – “люм”.

“Люм” – это люминесцентный микроскоп. С его помощью, при наличии специфических диагностических сывороток, мы можем обнаружить подозреваемого возбудителя даже в первичном материале, что обычно и делают в экстренных случаях. При диагностике же ООИ, исследование первичного материала с применением люминесцентной микроскопии входит в обязательный стандарт.

Но без выделения чистой культуры микроорганизмов диагностика бессмысленна, т. к. необходимо подобрать антибиотики для лечения. Поэтому на следующие сутки микробиолог просматривает посевы и отбирает «подозрительные» колонии (т. е. похожие по характеру роста на патогенные). Насколько колония подозрительная – зависит от опыта микробиолога, но сейчас первичные посевы делают сразу на несколько специальных сред, выявляющих те или иные биохимические особенности микроорганизмов, и уже на этом этапе можно определить вид возбудителя (например, характерный рост кишечной палочки на среде Эндо).

Если же дифференцировать микроорганизмы на этом этапе не получается, то определяют морфологию клеток в мазке по Граму и биохимическую активность. Мазок с окраской по Граму позволяет предположить, с кем мы имеем дело: палочкой или кокком, бациллой или вибрионом, или, вообще, грибом. Исследование биохимической активности микроорганизмов позволяет точно определить их видовую принадлежность, т. к. каждый вид бактерий обладает уникальным спектром биохимической активности. Раньше его определяли с помощью так называемого «пестрого ряда» — разлитых по пробиркам углеводов и аминокислот с индикаторами, меняющими цвет в зависимости от рН продуктов метаболизма бактерий.

Сейчас этот метод заменяется СИБами (системы индикаторные бумажные) или микропланшетами. По сути – это либо бумажные диски, пропитанные теми же углеводами, аминокислотами и индикаторами, на которые наносят исследуемую культуру микроорганизмов, либо микрообъемы этих углеводов и аминокислот, в которые вносят культуру. Это значительно ускоряет идентификацию, т. к. позволяет учитывать результат через несколько часов (в отличие от «пестрого ряда», который учитывается на следующие сутки).

В настоящее время довольно широко применяются различные автоматические бактериологические анализаторы, позволяющие по различным параметрам (например – импедансу) идентифицировать микроорганизмы. Однако все еще велик процент погрешности при работе с данными приборами, и handmade пока в почете.

Определив род и вид микроорганизма мы, во-первых, «отбрасываем» представителей нормальной микрофлоры человека (если она возможна в данном виде материала), во-вторых, подбираем набор антибиотиков, наиболее эффективных в отношении конкретного возбудителя.

В некоторых случаях, когда не требуется антибиотикограмма, для идентификации микроорганизмов можно пойти другим путем: серологическим. Один из наиболее распространенных методов серологической диагностики – иммуноферментный анализ. Для его проведения требуется лишь наличие определенного диагностикума, спектрофотометра (ридера) и принтера.

Определение чувствительности к антибиотикам можно осуществить двумя способами: качественным (диско-диффузионным) и количественным (т. н. Е-тест.)В первом случаем просто наносят на поверхность питательной среды слой микроорганизмов («газон», как его называют микробиологи) и сразу же выкладывают сверху бумажные диски, пропитанные антибиотиком. Через сутки оценивают рост микроорганизмов вокруг этих дисков: если он есть – микроб устойчив, если нет – антибиотик эффективен и им можно лечить больного).

Е-тест позволяет, помимо определения спектра антибиотикочувствительности, подобрать подавляющую концентрацию антибиотика для лечения. Собственно, название Е-теста связано с внешним видом этих тестовых полосочек, похожих на букву Е. Каждая палочка буквы пропитана разной концентрацией антибиотика.

Собственно, на этом и заканчивается бактериологическое исследование (но не заканчивается работа лаборатории!).

В любом микробиологическом боксе вы найдете еще один неизменный атрибут: термостат. Вариантов их масса, но назначение одно: это просто шкаф, внутри которого поддерживается оптимальная для роста микроорганизмов температура. В 90% случаев – это 37 градусов. Здесь живут все посевы и культуры, с которыми работает микробиолог в ходе исследования.

Для культивирования факультативных анаэробов к термостатам присоединяют баллоны с углекислым газом, а для анаэробов и вовсе вытесняют атмосферный воздух специальной газовой смесью.

Еще одна штука, всегда имеющаяся в лабораториях – холодильник. Назначение у него то же, что и у бытового (а зачастую в лабораториях используют именно бытовые) холодильника – хранить и охлаждать. Что только не хранят и не охлаждают в лабораторных холодильниках! Питательные среды, диагностические сыворотки, антибиотики, диагностикумы, бутерброды… Но никогда, слышите – никогда! не открывайте холодильники, которые опечатаны. В них хранятся культуры. Микробиологи называют это музеем – это те культуры, которые не используются в настоящее время в работе и находятся на длительном хранении в пробирках с полужидким агаром.

Во многих лабораториях в боксах можно найти один довольно забавный и неуместный, казалось бы, предмет – садовый опрыскиватель. Зачем он? Помните, мы говорили про аварии? Что же делать сотруднику, попавшему в аварию? «Сжечь все!» — пошутите вы, но микробиологи поступают более гуманно – просто орошают дезинфектантами из этих самых садовых опрыскивателей все помещение и друг друга, затем переодеваются и… идут в карантин (не всегда конечно, а только при работе с ООИ).

Автоклавная

Теперь, как после любого застолья – самая нелюбимая часть – уборка и мытье посуды. Перед мытьем посуду необходимо обеззаразить. Как правило, это делают не после каждого исследования, а одномоментно раз-два в неделю. Для этого используют все те методы, которые вы пытались заучивать на микробиологии: физические и химические. Химически обеззаразить – это значит залить дезинфектантом и подождать некоторое время. Дезинфектант плох тем, что покрывает только поверхности и может не попасть в полости. Поэтому так обеззараживают только стены, столы и руки.Из физических самым популярным является автоклав. В лабораториях, работающих с кровью он – единственный разрешенный (из-за устойчивости вируса гепатита В).

Никуда не делось банальное кипячение в течение 30 минут в содовом растворе. А вот про гигантские микроволновки мало кто слышал, хотя они разрешены санитарными правилами. Да-да: можно стерилизовать отходы в СВЧ-печи!

Ну а мытье посуды – это связующее звено в цикличности работы лаборатории, этакий символ бесконечности… С этого начинается работа и этим она заканчивается.

Особое оборудование

А теперь покажу вам то, чем обычная лаборатория, как правило, не располагает, и что можно увидеть лишь в лабораториях различных НИИ.

Масс-спектрометр это очень точные и чувствительные весы, способные «взвешивать» различные молекулы, в частности, пептиды, белки, нуклеиновые и жирные кислоты.Для того чтобы провести масс-спектрометрический анализ («взвешивание»), необходимо получить ионы (заряженные частицы) исследуемого вещества. MALDI — (МАЛДИ, матрично активированная лазерная десорбция и ионизация) – один из способов такой ионизации вещества. Он наилучшим образом подходит для исследования крупных биополимеров, таких как белки. Каждый микроорганизм имеет уникальное качественно-количественное соотношение белков. Имея базу данных белковых масс различных микроорганизмов и сравнивая с полученными данными можно проводить их идентификацию.

Что он может? Этот безумно дорогой девайс после танцев с бубном выдаст вам нечто следующее:AGTCTTTAACTCCACCATTAGCACCCAAAGCTAAGATTCTAATTTAAACTATTCTCTGTTCTTTCATGGGGAAGCAGATTTGGGTACCACCCAAGTATTGACTCACCCATCAACAACCGCTATGTATTTCGTACATTACT«Что за…?» — спросите вы. Но приглядитесь – это же последовательность нуклеотидов. Насеквенировав гигабайты таких последовательностей, прибор сверяет их с базой данных, определяя гены и их принадлежность тому или иному микроорганизму.

Что он может? То же самое, что обычный световой, только в 100000 раз лучше. Обычный световой микроскоп, как правило, дает увеличение в 1000 крат. Этот – 1 млн., Минимальное расстояние между двумя точками, которое он определяет – 0,3 нм – это диаметр 3 атомов водорода!

А еще в некоторых лабораториях живут джины, гномы, эльфы и Элема. Причем в этих лабораториях не варят зелья игроки в World of Warcraft, а занимаются вполне серьезными вещами: проводят ПЦР — полимеразную цепную реакцию. Не верите? Тогда знакомьтесь: термостат “Гном”, блок питания “Эльф” и аспиратор “Элема”.

Если вы увидите непонятного назначения прибор, опутанный многочисленными тоненькими трубками, словно где-то за ним притаился и ждет незадачливого новичка кибернетический паук — то, скорее всего, перед вами жидкостный хроматограф — прибор для разделения какой-либо смеси (а бактерии, с точки зрения химии — смесь молекул разных веществ) на отдельные вещества методом хроматографии с целью определения качественного состава.

Как известно, российская научная станция “Восток” в Антарктиде — самое холодное место на нашей планете, рекорд отрицательной температуры, зафиксированный там -89,2 градуса по Цельсию. Но в лабораториях тоже есть своя маленькая Антарктида, существующая не заморозки трупов подопытных, а для длительного хранения различных образцов — т. н. криоконсервирования. Это низкотемпературные морозильники, или как их принято называть — кельвинаторы, которые могут охладить до -86 градусов.

Если же вы хотите охладиться еще сильнее, то вот вам сосуд Дьюара с жидким азотом. -195 градусов вам обеспечено. Сразу скажу, что если опустить руку на несколько секунд в жидкий азот — она не затвердеет и не рассыпется как в к/ф “Терминатор 2”. Теплоемкость азота довольная низкая, поэтому вы почувствуете лишь холод.

Ну что ж, друзья — вот и закончилась наша маленькая виртуальная экскурсия по бактериологической лаборатории. Осталось сказать лишь пару слов о ее сотрудниках. Увы, но придя в настоящую лабораторию, вы увидели бы либо стариков, доживающих здесь свой век, либо молодых студентов-ординаторов, которые, доучившись, выпорхнут в мир более высоких зарплат. И это правда печально: эта возрастная пропасть, сформировавшаяся в 90-е, до сих пор не заполнилась, и большинство этих приборов и боксов так и стоят, не видя великих открытий, прислуживая в поликлиниках и диагностических лабораториях.

Источник: Медач

intalent.pro

Микробиологическая лаборатория и ее оборудование

Микробиологические лаборатории организуются при больницах и санитарно-эпидемиологических станциях (СЭС). Существуют также специальные лаборатории, в которых работают с возбудителями особо опасных инфекций, вирусологические лаборатории и др. Микробиологические лаборатории занимаются бактериологической диагностикой инфекционных заболеваний, исследуя испражнения, мочу, кровь, мокроту больных с целью обнаружения патогенных микроорганизмов — возбудителей заболевания. Помимо этого, в микробиологических лабораториях проводят санитарно-бактериологические исследования воды, воздуха, смывов с окружающих предметов, рук, пищевых продуктов для обнаружения санитарно-показательных микроорганизмов, указывающих на загрязнение патогенными микробами. При необходимости в объектах внешней среды определяют наличие патогенных микробов.

В связи с тем что в микробиологических лабораториях работают с заразным материалом, помещение их должно быть изолировано от других больничных помещений, пищеблоков, жилых комнат. В состав лаборатории входят:

 

1) лабораторные комнаты для проведения микробиологических исследований;

2) моечная;

3) препараторская для подготовки лабораторной посуды, приготовления питательных сред и других вспомогательных работ;

4) автоклавная;

5) комната, где производят прием материала и выдачу результатов исследования. Лабораторных животных, необходимых для постановки биологических проб, содержат в специальном изолированном помещении — виварии. В лабораториях, где объем работ невелик, можно объединить моечную и препараторскую, исключить комнату для приема анализов и т. д. 

Лабораторные комнаты должны быть просторными и светлыми, желательно с ориентацией окон на север или северо-запад, так как для работы необходим рассеянный свет. Стены окрашивают светлой масляной краской, пол покрывают линолеумом, лабораторные столы — пластиком или стеклом, что позволяет их легко дезинфицировать. В лабораторной комнате оборудуют застекленный бокс с предбоксником для проведения работ в стерильных условиях.. В боксе помещают бактерицидную лампу, стол, табуретку. В лабораторных комнатах находится специальное оборудование: термостат (рис. 23), холодильник, шкафы, центрифуга и др. Большое значение имеет правильная организация рабочего места. Рабочий стол устанавливают у окна таким образом, чтобы свет падал сбоку или прямо. На столе должны находиться только необходимые для работы предметы: спиртовка или газовая горелка, штативы, бактериологические петли, банка с дезинфицирующим раствором.

 

Персонал во время работы должен строго соблюдать следующие правила:

 

1) находиться в лаборатории можно только в специальном халате и шапочке;

2) в лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, хранить там продукты, принимать пищу;

3) исследуемый материал поступающий в лабораторию, рассматривается как заразный; его ставят на специальный поднос и обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором;

4) во время работы необходимо соблюдать осторожность, следить за чистотой рук, применять технические приемы, исключающие контакт с заразным материалом;

5) исследуемый материал, отработанные культуры подлежат уничтожению;

6) по окончании работы руки, инструменты, рабочее место обрабатывают дезинфицирующим раствором. Культуры микробов, необходимые для дальнейшей работы, ставят в холодильник или сейф и опечатывают.

Уборка помещений лаборатории. Уборку проводят ежедневно до и после работы влажным способом с применением дезинфицирующих средств. Пол протирают 2— 5% раствором карболовой кислоты или хлорамина. Стены, инвентарь и полы один раз в неделю моют горячей водой с мылом. Бокс убирают в конце рабочего дня, а утром перед работой облучают бактерицидными лампами.

Мытье лабораторной посуды. Посуду, содержащую заразный материал и культуры микробов, обеззараживают в автоклаве (рис. 24).

 

 

Нельзя обрабатывать посуду дезинфицирующим раствором, так как даже следы его задерживают рост микробов. Стеклянную посуду моют ершами с применением бикарбоната натрия, полужидкого мыла или стирального порошка. Для устранения белого налета стеклянную посуду помещают на 30— 40 мин в 5—10% раствор хлористоводородной кислоты. Сильно загрязненную посуду опускают в слегка подогретую хромовую смесь. Новую лабораторную посуду кипятят 15 мин в воде с мылом, прополаскивают, погружают в теплый 1—2% раствор хлористоводородной кислоты и кипятят 10—15 мин. В пипетки вводят кусок проволоки, на конец которой плотно накручивают кусок ваты, и тщательно протирают их. Предметные и покровные стекла должны быть хорошо обезжирены (нанесенная на стекло капля воды должна растекаться). Стекла, бывшие в употреблении, загрязненные краской и маслом, опускают на 2 ч в концентрированную серную кислоту или хромовую смесь, затем промывают проточной водой и кипятят в 5% растворе бикарбоната натрия 30—40 мин. Вымытую посуду ставят в сушильный шкаф или сушат на воздухе, пробирки закрывают пробками из ваты, заворачивают в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу или печи Пастера (рис. 25).

 

Техника взятия и доставки материала в микробиологическую лабораторию. Успех бактериологического исследования зависит от правильности взятия материала и своевременной доставки его в лабораторию. В зависимости от характера патологического процесса, места максимальной (избирательной) локализации возбудителя и пути его выделения в окружающую среду исследуют мокроту (при заболеваниях органов дыхания), испражнения (при желудочно-кишечных инфекциях), мочу (при поражении почек и мочевыводящих путей), гнойное отделяемое (из гнойных очагов), кровь (при кровяных инфекциях). 

 

Материал необходимо брать в стерильную посуду с соблюдением правил, обеспечивающих стерильность.Испражнения собирают в стерильные картонные тарелки или судно, предварительно обработанное раствором хлорной извести и тщательно промытое горячей водой для уничтожения следов дезинфицирующего раствора. Испражнения берут стерильным шпателем и вносят в стерильную пробирку с пробкой, содержащую консервант (глицериновая смесь, фосфатно-буферная смесь и Др.). Можно брать материал специальной стеклянной ректальной трубкой, которую вводят в прямую кишку на 8— 15 см. Мочу берут стерильным катетером в стерильную пробирку или банку. Рвотные массы собирают в стерильную широкогорлую банку, которую закрывают вощаной бумагой, мокроту — в стерильную банку с пробкой или в стерильную чашку Петри. Гнойное отделяемое ран, мазки из зева и носа берут стерильным ватным тампоном на проволоке.

Кровь из вены для посева берут стерильным шприцем, предварительно обработав локтевой сгиб 75% спиртом, и у постели больного засевают в количестве 5— 10 мл во флакон с жидкой питательной средой в соотношении 1 : 10 (10 мл крови в 100 мл питательной среды).

Трупный материал для микробиологического исследования необходимо брать в первые часы после смерти, так как в дальнейшем микрофлора кишечника распространяется по всему организму. Кровь из сердца берут стерильным шприцем. Из селезенки, печени и других органов после предварительного прижигания их поверхности вырезают стерильными ножницами кусочек и помещают в стерильный сосуд. При взятии отрезка кишечника или желудка предварительно накладывают две лигатуры выше и ниже места взятия.

На каждый стеклянный сосуд с инфекционным материалом необходимо наклеить этикетку, где указывают фамилию, имя, отчество больного и дату взятия материала. Надписи делают простым карандашом. К материалу, отправляемому в лабораторию, должно прилагаться направление, в котором указываются:

 

1) название материала;

2) учреждение, направившее материал;

3) фамилия, имя, отчество больного;

4) его возраст; 

5) дата взятия материала;

6) клинический диагноз;

7) цель исследования;

8) подпись направляющего врача. Взятый исследуемый материал должен быть доставлен в лабораторию в кратчайший срок.

 

Если этот срок удлиняется, материал необходимо сохранять в холодильнике при 4°С или на льду. Материал, содержащий вирусы, должен и при транспортировке находиться в условиях низкой температуры (например, в термосе со льдом).

Доставку инфицированного материала в лабораторию следует производить с соблюдением мер предосторожности: в закрытой посуде, в специальных металлических биксах, пеналах, чемоданах.

Доставка особо опасного материала (от больных холерой, чумой, натуральной оспой и др.) осуществляется в соответствии со специальными инструкциями. Исследуемый материал помещают в плотно закрывающиеся сосуды, обвязывают пергаментом или другим водонепроницаемым материалом, после чего их обертывают салфетками, смоченными 5% раствором фенола или лизола (необходима полная гарантия от попадания дезинфицирующего раствора в банки с материалом!). После этого сосуды помещают в жестяные коробки с крышкой или металлические биксы. При пересылке на далекие расстояния их помещают в деревянные ящики, опечатывают сургучной печатью и делают надпись: «Опасно. Не открывать во время пересылки». Доставка производится специальным транспортом в сопровождении двух лиц (один из них врач).

Поступивший в лабораторию материал регистрируют в специальном журнале. Исследуемый материал в лаборатории можно хранить: неконсервированный — при температуре 4°С не более 1—2 сут, консервированный в 50% глицерине, например кусочки органов и тканей,— в течение недель, а при необходимости длительного хранения — при замораживании до —15—20°С.

Режим работы микробиологической лаборатории зависит от степени опасности работы с тем или иным возбудителем.

 

По степени патогенности и опасности работы все возбудители разделены на группы: 

 

I — возбудители чумы;

II — возбудители высококонтагиозных эпидемических заболеваний: бруцеллеза, туляремии, сибирской язвы, сапа, натуральной оспы, различных риккетсиозов и др.; 

III — возбудители эпидемических бактериальных инфекций: кишечных, туберкулеза, дифтерии, патогенные анаэробы, спирохеты (возвратный тиф), простейшие (малярия) и др.;

IV — все патогенные кокки, гемоглобинофильные бактерии, сальмонеллы.

Работа с культурами I и II групп инфекций проводится в специальных лабораториях только с разрешения Министерства здравоохранения, III группы — в лабораториях СЭС, IV группы — во всех бактериологических лабораториях.

В бактериологической лаборатории существуют специальные формы регистрации и учета исследуемого материала, выделенных культур, их уничтожения, передачи культур патогенных микробов внутри лаборатории и вне ее.

 

Обязательным является ведение следующих журналов: 

 

1) форма 1—журнал регистрации материалов (культур), поступающих для исследования; 

2) форма2—журнал выделенных культур и их уничтожения 

3) форма 3 — журнал (для лабораторий, работающих с возбудителями I и II групп) движения микробных культур и материалов, подозрительных на зараженность.

microbiology.ucoz.org

Форма n 253/у рабочий журнал микробиологических исследований приказ минздрава СССР от 04-10-80 1030 (ред от 31-12-2002) об утверждении форм первичной медицинской документации учреждений здравоохранения (разделы 1-3 - 1-6-) (2018). Актуально в 2018 году

размер шрифта

+7 812 627 17 35

+7 499 350 44 79

8 (800) 333-45-16 доб. 100

ПРИКАЗ Минздрава СССР от 04-10-80 1030 (ред от 31-12-2002) ОБ УТВЕРЖДЕНИИ ФОРМ ПЕРВИЧНОЙ МЕДИЦИНСКОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ УЧРЕЖДЕНИЙ... Актуально в 2018 году

Код формы по ОКУД ____________________ Код учреждения по ОКПО _________________ Министерство здравоохранения Медицинская документация СССР Форма N 253/у ____________________________ Утверждена Минздравом СССР наименование учреждения 04.10.80 г. N 1030 Лаборатория __________________ РАБОЧИЙ ЖУРНАЛ микробиологических исследований Начат "..." ________ 19 . . г. Окончен "..." _________ 19 . . г. 1. В графу 3 "Регистрационный N" переписываются номера анализов регистрационного журнала. Анализ ведут на всех этапах пододним номером. 2. В графе 4 "Наименование среды и характер роста" отмечают название плотных питательных сред, на которые производят посев исследуемого материала, а также наличие или отсутствие подозрительных колоний. Для каждой среды используют отдельную горизонтальную строку. 3. Графы 6-26 "Тесты для идентификации" служат для характеристики биологических свойств микроорганизмов (ферментативная активность, антигенная структура, токсигенность и др.). 4. Расщепление углеводов рекомендуется отмечать следующими знаками: кг - при образовании кислоты и газа; к - при образовании кислоты без газообразования; - - расщепление отсутствует. 5. Ферментативную активность в отношении других веществ, а также образование индола и сероводорода и т.д. целесообразно отмечать знаками: (+) - реакция положительная; (-) - реакция отрицательная. 6. В графе 27 "Результат исследования" указать вид выделенных микроорганизмов и массивность обсеменения. Методы сбора материала и лабораторные исследования проводятся в соответствии со следующей нормативно - технической документацией (НТД перечислить): 1. _______________________________________________ 2. _______________________________________________ 3. _______________________________________________ 4. _______________________________________________ 5. _______________________________________________ 6. _______________________________________________ 7. _______________________________________________ 8. _______________________________________________ 9. _______________________________________________ 10. _______________________________________________ Для типографии! при изготовлении документа формат А4 ф. N 253/у

Дата	N N п/п	РегистрационныйN	Наименованиесреды и характер роста	Микроскопия	Тесты для
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13

и т.д. до конца страницы разворот ф. N 253/у

идентификации													Результат исследования	Дата окончания исследования.Подпись лица,проводившего исследование
14	15	16	17	18	19	20	21	22	23	24	25	26	27	28

www.zakonprost.ru

структура, оборудование, устройство рабочего места, нормативная документация

Ревдинский филиал государственного бюджетного образовательного учреждения среднего профессионального образования "Свердловский областной медицинский колледж"

Выполнила: студентка 311 группы

Николаева Дарья Владиславовна

Преподаватель: Втюрина

Галина Владимировна

Ревда 2013

Содержание

Введение.......................................................................................................3

1. Бактериологическая лаборатория....................................................4

1.1. Общие сведения...................................................................................4

1.2. Помещения разделяют на «заразную» и «чистую» зоны................4

2. Помещения бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места.............................................................................................5

3. Оборудования для бактериологической лаборатории...................7

3.1. Принцип идентификации микроорганизмов в MALDI BioTyper........................................................................................................7

3.2. Устройство бактериологической лаборатории на базе времяпролетного масс-спектрометра........................................................7

4. Дополнительное оснащение бактериологической лаборатории..................................................................................................9

5. Правила работы и поведения в лаборатории................................10

6. Уборка лабораторного помещения................................................12

7. Нормативная документация...........................................................13

Заключение.................................................................................................14

Таблица.......................................................................................................15

3

Введение

Бактериологические лаборатории играют важную роль в диагностике и лечении различных заболеваний, т. к. они не только определяют разновидность микроорганизмов вызывающих то или иное заболевание, но и помогают подобрать антибиотики и бактериофаги. Для наиболее эффективного лечения больных. Без бактериологических лабораторий многие заболевания трудно бы было вылечить.

4

1. Бактериологическая лаборатория.

1.1. Общие сведения.

Бактериологические лаборатории как самостоятельные структурные единицы организуются при санитарно-эпидемиологических станциях (СЭС), в инфекционных больницах, больницах общего типа, некоторых специализированных стационарах (например, в туберкулёзных, ревматологических, кожно-венерологических) и в поликлиниках.

Бактериологические лаборатории при СЭС исследуют на общую бактериальную загрязнённость, а также на заражённость условно патогенной и патогенной микрофлорой объекты внешней среды: воздух, воду, почву продукты питания; проводят обследование организованных коллективов и отдельных лиц на носительство патогенных бактерий кишечной группы, коринебактерий дифтерии, коклюша, паракоклюша, менингококка. Работа микробиологической лаборатории в комплексе с другими отделами СЭС имеет определённую задачу — оздоровление окружающей среды и снижение заболеваемости населения.

Бактериологические лаборатории при лечебно-профилактических учреждениях выполняют анализы, необходимые для постановки и уточнения диагноза инфекционного заболевания, способствуя правильному выбору специфического лечения и определению сроков выписки больного из инфекционной больницы. Предметом для исследования в бактериологических лабораториях являются:

• выделения из организма человека: моча, моча, кал, мокрота, гной, а также кровь, спиномозговая жидкость и трупный материал;

• объекты внешней среды: вода, воздух, почва, продукты питания, смывы с предметов инвентаря, рук и т. п.

studfiles.net

Правила работы в микробиологической лаборатории

1. К занятиям допускаются студенты только в белых халатах. Входить в лабораторию в пальто, в головном уборе, вносить посторонние вещи не разрешается.

2. Каждый студент работает на своем рабочем месте и несет ответственность за закрепленное за ним оборудованием, включая микроскоп, чистоту рабочего места.

3. Строго соблюдать правила обращения с реактивами и красителями.

4. Запрещается работать с неисправными электроприборами. Обо всех неисправностях следует сообщить преподавателю.

5. При работе со спиртовкой необходимо перед зажиганием продуть пары спирта, накопившиеся под крышкой, приподняв фитиль. Затем осторожно поджечь спиртовку. Не бросать горящих спичек, не зажигать спиртовку от спиртовки, не переносить зажженную спиртовку с одного места на другое.

6. При работе с культурами микроорганизмов следует быть предельно аккуратными, чтобы не допустить попадания содержимого пробирки на поверхность стола, одежды и т.д. В случае нарушения целостности объема, в котором находится культура (например, при разбивании, проливании) следует поставить в известность преподавателя и принять меры к дезинфекции.

7. Поскольку некоторые микроорганизмы в чистых культурах, особенно споры грибов, являются аллергенными, нельзя допускать их распыления: ни в коем случае не оставлять открытыми чашки Петри, пробирки, колбы с культурами микроорганизмов.

8. В лаборатории запрещается принимать пищу, пить, курить, жевать.

9. Перед уходом из лаборатории дежурный проверяет рабочие места, закрывает воду, выключат свет, электроприборы. После ознакомления с техникой безопасности при работе на кафедре микробиологии студенты расписываются в журнале.

В микробиологической лаборатории строго соблюдают ряд предосторожностей и поддерживают определенный режим. Ра­ботают в белых халатах, шапочках или косынках. На рабочем месте не должно быть лишних предметов. Все принадлежности располагают на определенных местах. Пробирки и колбы с культурами микроорганизмов должны иметь четкие надписи чернилами по стеклу, емкости с реактивами и растворами — этикетки. При работе со спиртовками остерегаются воспламе­нения паров спирта. Нельзя зажигать спиртовку от другой го­рящей спиртовки. Гасят пламя спиртовки только специальными колпачками. При воспламенении ватных пробок на них не дуют, так как это усиливает горение. Для предупреждения досту­па воздуха горящие пробки вводят в пробирки, колбы или на­крывают сверху полотенцем.

До и после работы тщательно моют и дезинфицируют по­верхность стола, на котором проводится исследование микро­организмов. Микробная масса не должна загрязнять руки, стол и окружающие предметы. Петли, иглы, пинцеты после каждого соприкосновения с микроорганизмами прожигают в пламени спиртовки или газовой горелки и ставят в специальный штатив. Пролившуюся микробную взвесь обезвреживают, используя де­зинфицирующие средства.

По окончании работы загрязненную микроорганизмами по­суду немедленно стерилизуют кипячением или автоклавированием, чтобы уничтожить живые клетки, и только после этого ее можно мыть. Поверхность плотных сред с микробами залива­ют дезинфицирующим раствором. Через сутки среды можно выбрасывать и мыть посуду. Использованные пипетки помеща­ют в 3 %-ный раствор хлорамина, после чего моют и стерили­зуют. Предметные и покровные стекла после работы помещают в дезинфицирующий раствор, затем тщательно моют в проточ­ной воде. Посуду моют только в резиновых перчатках. Неакку­ратное обращение с микроорганизмами может привести к обра­зованию в воздухе микробного аэрозоля.

При работе с бактерицидными лампами пользуются темны­ми или простыми защитными очками. Нельзя смотреть на свет лампы незащищенными глазами, так как это может привести к потере зрения.

Строгого соблюдения правил предосторожности требует об­ращение с аппаратами, работающими под давлением, напряже­нием или при высокой температуре.

В лаборатории не разрешается курить, есть, пить, много хо­дить, вносить в нее посторонние предметы. Категорически за­прещается выносить микробные культуры за пределы лабора­торного помещения.

Следует строго соблюдать личную гигиену — тщательно де­зинфицировать и мыть руки с мылом после окончания работы и перед едой.

В специальном журнале студенты и сотрудники делают за­пись о проведении инструктажа и ознакомлении с режимом работы в лаборатории.

Контрольные вопросы:

1.Конструкция и принцип работы термостата.

2. Конструкция и принцип работы автоклава.

3. Конструкция и принцип работы сушильного шкафа и центрифуги.

4. Предназначение лабораторного рН-метра и рефрактометра.

5.Что представляют собой фильтры Зейтца.

6. Устройство электронного микроскопа.

7. Приготовление препаратов для электронной микроскопии.

studfiles.net

Требования к микробиологической лаборатории

Тема 3 « Требования к микробиологической лаборатории»

Студенты изучают и конспектируют рекомендуемую литературу по следующим вопросам:

1.  Устройство микробиологической лаборатории

2.  Посуда для микробиологических анализов

3.  Специальные микробиологические приборы

4.  Микроскопия

Литература: №№ 1, 10, 11, 15, 16.

1. Устройство микробиологической лаборатории

Микробиологическая лаборатория, как правило, размещается в специально оборудованном помещении с изолированным входом. Комнаты должны быть просторные и светлые с естественным осве­щением не менее 110 лк. Стены в лаборатории должны быть гладки­ми, нижнюю часть их на высоту 170 см окрашивают светлой масля­ной или эмалевой краской, верхнюю часть и потолок белят известью или известковой краской, впитывающей влагу. Полы покрывают ли­нолеумом, пластиком или каким-либо другим легко моющимся мате­риалом, мебель окрашивают в светлые тона.

Основные помещения оборудуют столами лабораторного типа, шкафами и полками для хранения аппаратуры, посуды, реактивов. Столы должны иметь подводку электроэнергии и снабжены газовы­ми горелками, лампами дневного света. В лаборатории необходимо иметь водопровод и слив.

Стол для микроскопирования располагают перед окнами на се­верной стороне. В солнечные дни окна в помещении завешивают бе­лыми шторами для защиты от прямых солнечных лучей, от действия которых может выйти из строя микроскоп в связи с размягчением клея (канадского бальзама из пихтовой смолы), связывающего линзы в оптических системах, а также для защиты глаз от утомления при микроскопировании. Стол должен быть устойчивым, поэтому его лучше укреплять на кронштейнах. От окна микроскоп должен быть расположен на расстоянии около 1 м.

Кроме основного рабочего помещения лаборатория имеет бокс, стерилизационную, где размещены автоклавы и сушильные шкафы, термостаты или термостатированные комнаты для выращивания микроорганизмов, помещение для хранения культур, моечную, холо­дильную комнату и т. д.

Бокс представляет собой небольшую изолированную комнату, разделенную на две части перегородкой, и служит для работы с чистыми культурами микроорганизмов. Вход в основное рабочее помещение бокса осуществляется через тамбур с раздвижной дверью, что исключает рез­кое перемещение воздуха, и, следовательно, занесение извне посторонней микрофлоры. Оборудование бокса состоит из стола с легко моющейся поверхностью, стула, газовой горелки и бактерицидной лампы, укреплен­ной в специальном штативе или смонтированной на потолке бокса. Удоб­но иметь подсобный стол, на котором размещают необходимые во время работы предметы. Все оборудование бокса, его стены, пол и потолок пе­риодически моют и протирают дезинфицирующими растворами; перед работой бокс облучают в течение 40-60 мин ультрафиолетовыми лучами. Бокс может быть устроен и в основном рабочем помещении, но обязательно отделенным от остальной комнаты застекленными стенками и за­стекленным потолком.

При отсутствии бокса-комнаты широко используют настольные боксы разных конструкций; например, стеклянные настольные шкафы, рамы и дно которых сделаны из отполированного дерева. В сред­нем размеры шкафа составляют: ширина 62, высота 54 и глубина 50 см. Передняя стенка шкафа поднимается в пазах и может устанавли­ваться на разной высоте. Перед работой шкаф стерилизуют разбавлен­ным водой этиловым спиртом с объемной долей этилового спирта 70-75%. Во время работы шкаф открывают настолько, чтобы руки работа­ющего могли свободно двигаться.

В настоящее время используют герметически закрытые камеры, работа в которых осуществляется под отрицательным воздушным дав­лением с помощью прикрепленных к передней панели резиновых пер­чаток. В некоторых боксах («Ламинарах») чистота атмосферы рабоче­го пространства обеспечивается циркуляцией стерильного воздушного потока внутри камеры.

2.Посуда для микробиологических анализов

Для проведения работ по культивированию микроорганизмов, приготовлению питательных сред и для других целей пользуются по­судой, которая должна удовлетворять определенным требованиям и в первую очередь - не должна содержать посторонних веществ. Она должна быть тщательно вымыта и не должна выделять в среду ника­ких веществ, например щелочей, окислов железа, кислот и др.; лучше всего пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой по­судой.

Используют посуду из стекла, выдерживающего нагревание при высокой температуре; для изучения свойств микроорганизмов приме­няют стеклянные приборы, стекла для микроскопирования; для извле­чения микроорганизмов и пересевов - иглы и петли.

Посуда. В микробиологической практике чаще всего пользуются пробирками, чашками Петри и колбами разного вида.

В микробиологической практике чаще всего пользуются пробир­ками и чашками Петри.

Пробирки должны быть без ранта, из прозрачного стекла, разме­ром 18x2,0 см и 18x1,5 см. Чтобы предохранить содержимое пробирок от попадания из воздуха микробов и культуры от высыхания их закрывают ватными пробками.

Чашки Петри. Чашка Петри состоит из двух чашек разного диа­метра. В чашку с меньшим диаметром помещают питательную среду, чашка большего диаметра служит крышкой. Диаметр чашек Петри 8-10-15 см, высота 1,5-2,0 см.

 

 

Рис. 1. Посуда для культивирования микроорганизмов: 1 - качалочная колба, 2 - качалочная колба с отбойниками, 3 - коническая колба, 4 - чашка Петри, 5 - пробирка, 6 - матрац.

Стеклянный шпатель Дригалъского используют для растирания по поверхности плотной питательной среды в чашках Петри культуры микроорганизмов при наращивании биомассы.

Колбы Виноградского - это укороченные конические колбы с ши­роким дном; матрацы - плоские флаконы.

Химическую посуду также используют при выполнении микробио­логических работ: конические и круглые плоскодонные колбы объемом 50, 100,250 см3 и 1,2,3,5 дм3; бюретки, цилиндры, химические стаканы, ворон­ки различных систем, склянки. Вся посуда, служащая для питательных сред и чистых культур микроорганизмов, закрывается ватными пробками

Пипетки используются как градуированные, так и не градуирован­ные емкостью 1 -5 и 10 см3 длиной около 28 см и пастеровские пипетки с оттянутым капилляром.

3. Специальные микробиологические приборы

Специальные приборы. В микробиологии для горячего фильтро­вания расплавленных плотных сред применяют медные воронки с двой­ными стенками. Сбоку воронки имеется отросток для подогревания воды. В середину медной воронки вставляют стеклянную воронку с бу­мажным или ватным фильтром.

Бродильный прибор Эйнгорна применяют для определения коли­чества газа, выделяемого при развитии микроорганизмов. Закрытое колено прибора и часть открытого заполняют горячей питательной средой или в стерильный прибор вливают стерильную среду. После посева выделяющийся при брожении газ будет скапливаться в закры­том колене прибора (рис. 4).

Бродильными трубками Дунбара пользуются для определения газообразования при брожении. Это стеклянные трубки длиной 30 см и диаметром 0,8 см, запаянные с одного конца и изогнутые под углом 40°). Длина закрытого колена трубки 10 см, открытого - 20 см (рис. 5).

Рис. 4. Бродильный прибор Рис. 5. Трубки Дунбара для определения

Эйнгорна: а - с газообразующей способности дрожжей к брожению: культурой, б - с культурой не а - трубка со средой, б - штатив, образующей газа.

Трубки помещают в специальные деревянные или металличес­кие штативы. Перед посевом закрытое колено надо заполнить средой; если после стерилизации останется пузырек воздуха, его удаляют, на­клоняя трубку.

Вспомогательные предметы. Для пересева (посева, инокуля­ции) культуры с одной среды на другую или для приготовления препа­рата микроорганизмов, выращенных на поверхности плотной или в жидкой среде, пользуются бактериологической петлей или иглой и шпателем Дригальского (рис. 6). Делают их, используя тонкую (0,4-0,5 мм) проволоку из вольфрама или нихрома. Проволоку длиной 7-8 см зак­репляют в металлическом или стеклянном держателе или впаивают в стеклянную палочку. Конец проволоки загибают на конце пипетки или заточенного карандаша в виде петельки (кольца) диаметром 2-4 мм, концы которой не должны расходиться, иначе жидкость не будет удер­живаться.

 

 

Рис. 6 Бактериологическая игла (а), петля (б), шпатель Дригальского (в), пастеровская пипетка (г).

Ввиду легкости стерилизации такая петля или игла является уни­версальным инструментом при выполнении различных микробиологи­ческих работ. При работе с мицелиальными грибами используют крю­чок. Для посевов на чашках Петри используют стерильный шпатель Дригальского.

1.  Микроскопия

При любых микробиологических исследованиях необходимо иметь точные сведения о морфологических особенностях интересующего организма. Изучение общей организации и тонкой струры клеток микроорганизмов, величина которых измеряется в большинстве случаев микронами (микрометрами) (1 мкм = 0,001 мм = 10 возможно только с помощью специальных приборов - микроскоп обеспечивающих увеличение исследуемых объектов в сотни ( микроскопия) и десятки тысяч раз (электронная микроскопия).

Изображение в световом микроскопе формируется вслед того, что объект и различные элементы его структуры избирательно поглощают свет с различной длиной волны (абсорбционный траст) или вследствие изменения фазы световой волны при прохождении света через объект (фазовый контраст). Световая микроскопия включает обычную, просвечивающую микроскопию (светло - и темнопольную), фазово-контрастную и люминесцентную.

Светлопольная микроскопия.

Среди большого разнообразия моделей микроскопов, выпускаемых отечественной промышленностью и за рубежом, для исследований чаще всего используются биологические микроскопы (МБ МБИ-2, Биолам Р-11 и др.), которые дают увеличение от 56 до 13 1800 раз. Пользуясь обычным световым микроскопом, определяют не только форму клеток микроорганизмов, степень морфологической гетерогенности, размер, подвижность, но и немалое число элементов структуры клеток, используя их биохимические реакции при окрашивании препаратов.

Контрольные вопросы к теме 3.

Из каких отделений должна сосотоять микробиологическая лаборатория? Какая посуда используется в микробиологической лаборатории? Какие спецприборы и вспомогательные предметы должны быть в микробиологической лаборатории?

4. Какой вид микроскопии используется для исследований вин?

Добавить комментарий

vinograd-vino.ru

---

Смотрите также

• 
  Журнал пожарная безопасность 2011
• 
  Журнал подруга читать онлайн
• 
  Журнал погремушка читать онлайн
• 
  Журнал поверки весов образец
• 
  Журнал плавание официальный сайт
• 
  Журнал пенсионерочка официальный сайт
• 
  Журнал отгрузок товара образец
• 
  Журнал окно в москву
• 
  Журнал огонек номер 33
• Журнал общей химии жох
• Журнал молекулярная биология архив